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GUS染色液(即用型)實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀:116 發(fā)布時(shí)間:2021-10-27提 供 商 | 上海古朵生物科技有限公司 | 資料大小 | 14KB |
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資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 116次 |
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產(chǎn)品名稱:GUS染色液(即用型)
規(guī)格:50ml/100ml
分類:植物染色
儲(chǔ)存條件:—20℃,避光,6個(gè)月
用途:用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)的簡(jiǎn)易檢測(cè)。
注意事項(xiàng):染色原理是適宜的反應(yīng)條件下,β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn),可用肉眼或顯微鏡觀察到。
簡(jiǎn)介:GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶,該基因常作為融合標(biāo)記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達(dá)E.coli GUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性
GUS染色液(即用型)又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡(jiǎn)稱為GUS染色液,其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn),可用肉眼或顯微鏡觀察到。GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色,多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)分析,該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡(jiǎn)便。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
1、配制X-Gluc溶液(50x):取1ml X-Gluc Solution*加至1支X-Gluc中,充分溶解,即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存,1個(gè)月有效。
2、配制X-Gluc染色液:該染色液最好現(xiàn)用現(xiàn)配,短期貯存可以4℃保存3天。
3、取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色液,使GUS染色液*浸沒組織。
4、37℃孵育,隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng),藍(lán)色漸漸出現(xiàn),當(dāng)表達(dá)量較高時(shí),GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)。
5、用乙醇脫去樣本的葉綠素,一般樣本浸沒于乙醇1~3h,至陰性對(duì)照呈白色。如有必要可重復(fù)該脫色步驟,以便*清除葉綠素。樣本保存于乙醇中,可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察,白色背景上的藍(lán)色即為GUS表達(dá)位點(diǎn)。
注意事項(xiàng):
1、 配制好的GUS染色液可以4℃避光保存3天。
2、 由于組織特異性等原因,藍(lán)色顏色反應(yīng)可能不*一致,應(yīng)注意摸索具體實(shí)驗(yàn)條件。擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗根就可直接染色;煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉須在染色前切成薄片(1-3mm);當(dāng)操作大的組織和樣品時(shí),可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物和酶滲入細(xì)胞,建議采購(gòu)常規(guī)GUS染色液。