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人乙肝核心抗原（HBcAg）elisa試劑盒樣品收集、處理及操作步驟
閱讀：59 發(fā)布時(shí)間：2019-5-31| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15.5KB |
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人乙肝核心抗原（HBcAg）elisa試劑盒樣品收集、處理及操作步驟
樣品收集、處理及保存方法
1、 血 清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血 漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測，1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿--－將組織加入適量鹽水搗碎，1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保 存----如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血，如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾，不要在37℃或更高的溫度加熱解凍，應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔，每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。