信帆生物細說：T細胞亞群檢測試劑盒的樣本制備方法以及操作步驟

信帆生物供應T 細胞亞群檢測試劑盒，可以用于檢測CD3,CD4,CD8,試劑盒配抗體，試劑盒操作簡單，資料穩(wěn)定，深受廣大用戶青睞，歡迎大家咨詢！

T 細胞亞群檢測試劑盒說明書

一：試劑盒組成：

1.防脫片劑 2ml

2.固定液 10ml

3.A 小鼠抗人 CD3 單抗 1ml

B 小鼠抗人 CD4 單抗 1ml

C 小鼠抗人 CD8 單抗 1ml

4.生物素標記羊抗小鼠 IgG（ IgG/Bio） 1.5ml × 2

5.堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2

6.A 底物增強劑（40×)200μl

B 底物液（40×) 200μl

C 底物緩沖液（10×) 800μl

7.細胞核復染液 5ml

8.封片劑 1ml

9.記號筆 1 支

10.PBS 2 包(1000ml)

二：標本制備：

取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血 1～2ml，PBS 稀釋 1-2 倍后，沿裝有等量淋巴

細胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000

轉(zhuǎn)/分）15-20 分鐘，吸取兩液面交界處的單個核細胞層，加 5 倍 PBS，離心（1000

轉(zhuǎn)/分）5 分鐘，棄上清液，沉淀即為單個核細胞。利用試管中剩余的少許回流

液體（約一滴）混勻細胞，制成單個核細胞懸液。滴 30μl 細胞懸液于載玻片上，

靜置 2 分鐘使細胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或 37℃溫箱 1 小時

烤干?；蛴?PBS 將單個核細胞調(diào)至 2×105個/ml，離心涂片機 1000 轉(zhuǎn)離心 1-2

分鐘制片，快速吹干或 37℃溫箱 1 小時烤干。涂片前取防脫片劑 5-10μl 均勻

推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細胞涂片，以

防掉片。

三：顯色劑的配制：

分別取 A 液 25ul，B 液 25ul 置于干凈試管中混勻，室溫放置 2-5 分鐘，加 1ml

蒸餾水，混勻，再加 C 液 100ul 待用。

*使用前，根據(jù)所需顯色劑用量，按照以上比例現(xiàn)配現(xiàn)用。

四：標本染色：

1. 充分干燥（室溫 2 小時以上或過夜）的細胞涂片先用記號筆在標本外畫

圈，然后滴加固定液 50μl，室溫靜置 2-3 分鐘，用 PBS 淋洗，擦干玻片背面及

細胞外的 PBS。

*以下反應均需在濕盒中進行。

2. 分別滴加抗人 CD3、CD4、CD8 單抗適量(10-30μl）,4℃過夜，PBS 淋洗 3 次。

3. 滴加生物素標記抗小鼠 IgG 適量（10-30μl），37℃孵育 30-45 分鐘，PBS

淋洗 3 次。

4. 滴加堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育 30-45 分鐘，PBS

淋洗 3 次。

5. 滴加顯色劑 30-50μl，室溫顯色 20-40 分鐘?？稍陲@微鏡下觀察，待細胞膜

上出現(xiàn)紅色標記物時，用 PBS 淋洗。

6. 滴加細胞核復染液 30-50μl，30 秒后自來水淋洗。

7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。

五：觀察：

高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù) 100-200 個單個核細胞，細胞表面有紅色標記物

為陽性細胞。算出陽性率。

六：正常參考值：

正常人外周血中，陽性細胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，

20-30%；CD4/CD8 的比值在 1.5-2.0 范圍內(nèi)。

七：儲存條件及有效期：

2-8℃保存，禁止冷凍，有效期為 12 個月。有效期內(nèi)可在 0-25℃范圍內(nèi)七天短

時運輸。使用時應及時及拿及用，使用后應立即放回冰箱。生產(chǎn)日期，使用期限

或失效日期見標簽。

八：注意事項：

1. 免疫細胞化學檢測是一種包含多步驟的檢測方法，試劑的選擇、樣本的處理、

涂片的制備、染色及其結(jié)果的判讀均需要進行專業(yè)的培訓。

2. 任何陽性或陰性的解讀，應由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學，臨床表現(xiàn)及其它

檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。

3. 復染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。

4. 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在，待測抗原編碼

基因變異，抗原低表達或抗原修復不當?shù)?，都會造成抗原無法檢出。

5. 本試劑僅對經(jīng)處理的人外周血細胞進行驗證，不做其他用途

6. 試劑盒使用中，應有適當?shù)姆雷o措施，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸。

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